紫外线消毒机器人的杀菌工作原理是通过紫外线灯发出的高能紫外线辐射，经照射后破坏微生物细胞的DNA（脱氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）的分子结构，造成生长性细胞和（或）再生性细胞死亡，达到除菌消毒的效果。而在紫外线的频谱中，240nm-280nm（UVC）波段的紫外线是最有效的杀菌消毒波段。
值得关注的是，大部分病毒的RNA结构相对简单，运用相应强度的UVC辐射即可有效杀灭相应的病菌（特别指出的是：2019-nCov（新型冠状病毒）是由RNA复制，需要更加高效的杀菌措施才能扼杀病菌。在现行的医疗卫生消毒标准下，尤其是在医疗环境下，UVC属于广谱杀菌，能有效杀灭常见的病毒细菌，是高效便捷的杀菌消毒方式。